Visvairāk pakļauti HPLC kļūmēm un risinājumiem

Tā kā HPLC ir augstas precizitātes instruments, tas var viegli radīt dažas apgrūtinošas nelielas problēmas, ja lietošanas laikā tas netiek izmantots pareizi.Viena no visbiežāk sastopamajām problēmām ir kolonnu saspiešanas problēma.Kā ātri novērst kļūdainu hromatogrāfu.HPLC sistēma galvenokārt sastāv no rezervuāra pudeles, sūkņa, inžektora, kolonnas, kolonnas temperatūras kameras, detektora un datu apstrādes sistēmas.Visai sistēmai balsti, sūkņi un detektori ir galvenās sastāvdaļas un galvenās vietas, kurās var rasties problēmas.

Kolonnas spiediena atslēga ir joma, kurai, izmantojot HPLC, jāpievērš īpaša uzmanība.Kolonnas spiediena stabilitāte ir cieši saistīta ar hromatogrāfiskās pīķa formu, kolonnas efektivitāti, atdalīšanas efektivitāti un aiztures laiku.Kolonnas spiediena stabilitāte nenozīmē, ka spiediena vērtība ir stabila pie stabilas vērtības, bet gan to, ka spiediena svārstību diapazons ir no 345 kPa līdz 50 PSI (ļaujot izmantot gradienta eluēšanu, ja kolonnas spiediens ir stabils un lēnām mainās).Pārāk augsts vai pārāk zems spiediens ir kolonnas spiediena problēma.

Visvairāk pakļauti HPLC kļūmēm un risinājumiem

1, augsts spiediens ir visizplatītākā problēma HPLC izmantošanā.Tas nozīmē pēkšņu spiediena paaugstināšanos.Kopumā ir šādi iemesli: (1) Parasti tas ir saistīts ar plūsmas kanālu bloķēšanu.Šajā brīdī mums tas ir jāpārbauda pa daļām.a.Vispirms nogrieziet vakuumsūkņa ieplūdi.Šajā brīdī PEEK caurule tika piepildīta ar šķidrumu tā, lai PEEK caurule būtu mazāka par šķīdinātāja pudeli, lai redzētu, vai šķidrums pilēja pēc vēlēšanās.Ja šķidrums nepil vai pil lēni, šķīdinātāja filtra galva ir bloķēta.Ārstēšana: pusstundu mērcēt 30% slāpekļskābē un noskalot ar īpaši tīru ūdeni.Ja šķidrums nejauši pil, šķīdinātāja filtra galva ir normāla un tiek pārbaudīta;b.Atveriet iztukšošanas vārstu tā, lai kustīgā fāze neizietu cauri kolonnai, un, ja spiediens netiek būtiski samazināts, filtra baltā galva tiek bloķēta.Apstrāde: filtrēti baltie plankumi tika noņemti un pusstundu apstrādāti ar ultraskaņu ar 10% izopropanolu.Pieņemot, ka spiediens nokrītas zem 100PSI, filtrētā baltā galva ir normāla un tiek pārbaudīta;c.Noņemiet kolonnas izejas galu, ja spiediens nesamazinās, kolonna tiek bloķēta.Ārstēšana: ja tas ir bufera sāls aizsprostojums, skalojiet par 95%, līdz spiediens ir normāls.Ja šķēršļus izraisa kāds labāk saglabājies materiāls, ir jāizmanto spēcīgāka plūsma nekā pašreizējā kustīgā fāze, lai virzītos uz normālu spiedienu.Ja ilgstošas ​​tīrīšanas spiediens nesamazinās saskaņā ar iepriekš minēto metodi, var uzskatīt, ka kolonnas ieplūde un izplūde ir savienota ar instrumentu, gluži pretēji, un kolonnu var tīrīt ar mobilo fāzi.Šobrīd, ja kolonnas spiediens joprojām nav samazināts, kolonnas ieejas sieta plāksni var nomainīt tikai, bet, ja darbība nav laba, ir viegli samazināt kolonnas efektu, tāpēc mēģiniet izmantot mazāk.Sarežģītu problēmu gadījumā var apsvērt kolonnas nomaiņu.

(2) Nepareizs plūsmas ātruma iestatījums: pareizo plūsmas ātrumu var atiestatīt.

(3) Nepareiza plūsmas attiecība: dažādu plūsmu proporciju viskozitātes indekss ir atšķirīgs, un lielākas viskozitātes plūsmas atbilstošais sistēmas spiediens ir arī lielāks.Ja iespējams, zemākas viskozitātes šķīdinātājus var nomainīt vai no jauna iestatīt un sagatavot.

(4) Sistēmas spiediena nulles novirze: noregulējiet šķidruma līmeņa sensora nulli.

2, spiediens ir pārāk zems (1) parasti izraisa sistēmas noplūde.Kā rīkoties: atrodiet katru savienojumu, jo īpaši saskarni abos kolonnas galos, un pievelciet noplūdes vietu.Noņemiet statni un pievelciet vai izklājiet PTFE plēvi ar atbilstošu spēku.

(2) Gāze nonāk sūknī, bet spiediens parasti šajā laikā ir nestabils, augsts un zems.Nopietnāk, sūknis nespēs absorbēt šķidrumu.Apstrādes metode: atveriet tīrīšanas vārstu un notīriet ar plūsmas ātrumu 3–5 ml/min.Ja nē, gaisa burbuļi tika aspirēti pie izplūdes vārsta, izmantojot speciālu adatas cauruli.

(3) Nav mobilās fāzes izplūdes: pārbaudiet, vai rezervuāra pudelē ir kustīgā fāze, vai izlietne ir iegremdēta kustīgajā fāzē un vai sūknis darbojas.

(4) Atsauces vārsts nav aizvērts: atsauces vārsts ir aizvērts pēc palēninājuma.Parasti tas samazinās līdz 0,1.~ 0,2 ml/min pēc atsauces vārsta aizvēršanas.

Kopsavilkums:

Šajā rakstā ir analizētas tikai parastās problēmas šķidruma hromatogrāfijā.Protams, mūsu praktiskajā pielietojumā mēs saskarsimies ar vairākām citām problēmām.Kļūmju apstrādē mums jāievēro šādi principi: mainīt tikai vienu faktoru vienlaikus, lai noteiktu saistību starp hipotētisko faktoru un problēmu;Parasti, nomainot detaļas problēmu novēršanai, mums jāpievērš uzmanība tam, lai demontētās neskartās daļas tiktu novietotas atpakaļ vietā, lai novērstu atkritumu izšķērdēšanu;Laba ierakstīšanas paraduma veidošana ir kļūdu novēršanas panākumu atslēga.Noslēgumā jāsaka, ka, izmantojot HPLC, ir svarīgi pievērst uzmanību paraugu pirmapstrādei un pareizai iekārtas darbībai un apkopei.