Rekombinanto olbaltumvielu antigēniem bieži ir vairāki dažādi epitopi, no kuriem daži ir sekvences epitopi, bet daži ir strukturāli epitopi.Poliklonālās antivielas, kas iegūtas, imunizējot dzīvniekus ar denaturētiem antigēniem, ir atsevišķiem epitopiem raksturīgu antivielu maisījumi, un tās var izmantot vispārīgi, lai noteiktu dabiskās struktūras vai denaturētus mērķa proteīnus.Denaturēto proteīnu kā imunogēnu izmantošanas blakus ieguvums ir tas, ka denaturētie proteīni mēdz būt imunogēnāki un var stimulēt spēcīgu imūnreakciju dzīvniekiem.
Escherichia coli ekspresijas sistēmu parasti izvēlas antigēnu nolūkos, jo tā ir visdārgākā sistēma laika un naudas ziņā.Lai uzlabotu mērķa proteīna ekspresijas iespēju un attīrīšanas ērtību, dažkārt tiek ekspresēts tikai neliels mērķa proteīna fragments, piemēram, specifisks domēns.
Olbaltumvielu trīsdimensiju struktūra
Proteīna specifiskais domēns
Ja antivielu sagatavošanas mērķis ir tikai ķermeņa masas noteikšanai, ir ekonomiski un ātri izmantot sintētisko mazo peptīdu kā antigēnu, taču pastāv vājas imunogenitātes vai neregenitātes risks, jo peptīda segments nav izvēlēts pareizi.Tā kā antivielu sagatavošana prasa ilgu laiku, bieži tiek atlasīti divi vai trīs dažādi peptīdu segmenti, lai sagatavotu antivielas, izmantojot polipeptīda antigēnu, lai nodrošinātu eksperimenta panākumus.
Polipeptīda antigēna tīrībai imunizācijai ir jābūt lielākai par 80%.Lai gan teorētiski ar augstāku tīrību var iegūt antivielas ar labāku specifiskumu, praksē dzīvnieki vienmēr ražo lielu skaitu nespecifisku antivielu, tādējādi maskējot antigēna tīrības priekšrocības.
Turklāt antivielu sagatavošana no maziem peptīdiem ir jāsaista ar atbilstošu nesēja antigēnu, lai uzlabotu tā imunogenitāti.Divi izplatīti antigēnu nesēji ir KLH un BSA.
Izlikšanas laiks: 23.03.2023